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in 5% CO2/95% air. Phorbol 12-myris
in 5% CO2/95% air. Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)
was added at a concentration of 162 nM to promote differentiation
of THP-1 cells into macrophages as previously described
by Furundzija et al. [55], with some modifications.
Macrophage differentiation was allowed for 48 h and it was
determined by cell morphology and total adhesion to the
plate. Human THP-1 macrophages-like were seeded at a
density of 1,000,000 cells per 2-mL in a 6-well plate and
after complete adhesion, treated with sterile-filtered UAH
and EAH at a concentration of 1 mg/mL for 24 h. This
concentration was selected based on our preliminary data
of the concentration needed to inhibit 50% of the antiinflammatory
pathway (IC50) [26]. To stimulate inflammation,
cells were treated with 1 μg/mL LPS dissolved in
growth medium. Cells treated with PBS and LPS served as
positive control while cells treated with PBS-alone served
as negative control. After 24 h of treatment, growth
medium was aliquot and immediately frozen at −20°C until
use.
was added at a concentration of 162 nM to promote differentiation
of THP-1 cells into macrophages as previously described
by Furundzija et al. [55], with some modifications.
Macrophage differentiation was allowed for 48 h and it was
determined by cell morphology and total adhesion to the
plate. Human THP-1 macrophages-like were seeded at a
density of 1,000,000 cells per 2-mL in a 6-well plate and
after complete adhesion, treated with sterile-filtered UAH
and EAH at a concentration of 1 mg/mL for 24 h. This
concentration was selected based on our preliminary data
of the concentration needed to inhibit 50% of the antiinflammatory
pathway (IC50) [26]. To stimulate inflammation,
cells were treated with 1 μg/mL LPS dissolved in
growth medium. Cells treated with PBS and LPS served as
positive control while cells treated with PBS-alone served
as negative control. After 24 h of treatment, growth
medium was aliquot and immediately frozen at −20°C until
use.
0/5000
en el aire de la CO2/95% del 5%. Forbol 12-miristato 13-acetato (PMA)se agregó a una concentración de 162 nM para promover la diferenciaciónde las células THP-1 en macrófagos anteriormente descritopor Furundzija et al [55], con algunas modificaciones.Diferenciación de macrófagos fue permitida durante 48 h y sedeterminada por la adhesión de la morfología y el total del celular a laplaca. Humana THP-1 como los macrófagos fueron sembradas en undensidad de 1.000.000 células por 2 mL en una placa de 6 pozos ydespués de la completa adhesión, tratado con filtrado estéril UAHy EAH a una concentración de 1 mg/mL por 24 h. estoconcentración fue seleccionada basado en nuestros datos preliminaresde la concentración necesaria para inhibir el 50% de los antiinflamatoriosvía (IC50) [26]. Para estimular la inflamación,las células fueron tratadas con LPS de 1 μg/mL disueltos enmedio de crecimiento. Células tratadas con PBS y LPS sirvió comocontrol positivo mientras que las células tratadas con PBS solo sirvecomo control negativo. Después de 24 h de tratamiento, crecimientomedio fue de alícuota y congelada inmediatamente a −20 ° C hastauso.
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En el 5% de CO2 / 95% de aire.12 13 forbol miristato de acetato (PMA)
fue introducido en una concentración de 162 nm para promover la diferenciación
de celulas THP - 1 en los macrófagos como descrito anteriormente
por Furundzija et al.[55], con algunas modificaciones.
macrophage diferenciación fue permitido para 48 h y era
determinado por la morfologia celular y total adherencia a la
plato.Los macrófagos como THP - 1 fueron sembrados en un
Densidad de 1.000.000 de células por 2 ml en una placa de 6 pocillos y
después de completar la adherencia, tratados con sterile filtered UAH
y eah, a una concentración de 1 mg / ml durante 24 h. Esta
concentración fue seleccionado sobre la base de los datos preliminares
de la concentración necesaria para inhibir el 50% de los antiinflamatorios
Pathway (CI50) [26].Para estimular la inflamación,
células fueron tratados con 1 μg / ml de LPS disuelto en
Medio de crecimiento.Las celulas tratadas con PBS y LPS sirvió como control positivo mientras que las celulas tratadas con
PBS solo sirve como control negativo.Después de 24 h de tratamiento, el crecimiento
medio fue de alícuota y de inmediato congelados a - 20 °C hasta
.
fue introducido en una concentración de 162 nm para promover la diferenciación
de celulas THP - 1 en los macrófagos como descrito anteriormente
por Furundzija et al.[55], con algunas modificaciones.
macrophage diferenciación fue permitido para 48 h y era
determinado por la morfologia celular y total adherencia a la
plato.Los macrófagos como THP - 1 fueron sembrados en un
Densidad de 1.000.000 de células por 2 ml en una placa de 6 pocillos y
después de completar la adherencia, tratados con sterile filtered UAH
y eah, a una concentración de 1 mg / ml durante 24 h. Esta
concentración fue seleccionado sobre la base de los datos preliminares
de la concentración necesaria para inhibir el 50% de los antiinflamatorios
Pathway (CI50) [26].Para estimular la inflamación,
células fueron tratados con 1 μg / ml de LPS disuelto en
Medio de crecimiento.Las celulas tratadas con PBS y LPS sirvió como control positivo mientras que las celulas tratadas con
PBS solo sirve como control negativo.Después de 24 h de tratamiento, el crecimiento
medio fue de alícuota y de inmediato congelados a - 20 °C hasta
.
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